更新日期:2023-12-14
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廠商性質:生產廠家
所在城市:上海市
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
其原理是在(zai)末端脫氧(yang)核糖(tang)核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的(de)(de)作用下,在(zai)基因組(zu)DNA斷(duan)裂時暴露出的(de)(de)3′-羥基(3′-OH)末端摻入生(sheng)物(wu)(wu)素(su)(Biotin)標志的(de)(de)dUTP,隨后通過Biotin與連接辣根過氧(yang)化酶的(de)(de)鏈霉親和素(su)(Streptavidin-HRP)特異結合(he),在(zai)辣根過氧(yang)化酶底物(wu)(wu)二氨基聯苯胺(DAB)的(de)(de)存在(zai)下,產生(sheng)深棕色的(de)(de)不溶物(wu)(wu),從而特異準確地定位(wei)凋亡(wang)的(de)(de)細胞。
本試劑盒可用于石蠟切片、冰凍切片和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測,檢測結果可在普通光學顯微鏡下直接觀察計數。
包裝清單:
產品編號 | 產品名稱 | 包裝1 | 包裝2 |
SJ1271 | TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(DAB顯色法) | 20T | 50T |
● | 說明書 | 一份 |
產品組成:
編號 | 組分 | 20T | 50T | 儲存條件 |
試劑(ji)(A) | 50× Proteinase K | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(B) | 10 × DNase I Buffer | 100 ul | 500 ul | -20℃ |
試劑(C) | DNase I | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(D) | Equilibration Buffer | 2 ml | 10 ml | -20℃ |
試劑(E) | 5×TdT Enzyme Buffer | 200 ul | 1 ml | -20℃ |
試劑(F) | Recombinant TdT Enzyme | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(G) | Biotin-11-dUTP | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(H) | dATP | 20 ul | 100 ul | -20℃ |
試劑(ji)(I) | Streptavidin-HRP | 20 ul | 100 ul | 4℃ |
試劑(J) | DAB-A solution | 1 ml | 5 ml | -20℃ |
試劑(ji)(K) | DAB-B solution | 50 ul | 250 ul | -20℃ |
保存條件:
Streptavidin-HRP, 4℃, 其余試(shi)劑-20 ℃保存,一年有效。
操作(zuo)步驟:
1、樣本處理:
a) 石蠟切片:經二甲(jia)笨、酒精(jing)脫(tuo)蠟,復水。脫(tuo)蠟應充分(fen)。
b) 冰(bing)凍(dong)切片(pian):流水沖洗(xi),去除OCT包埋(mai)膠(jiao)后,用純水洗(xi)3次。
c) 細(xi)胞飛片(pian):用組織固(gu)定(ding)液固(gu)定(ding)后,用PBS洗(xi)三次,每(mei)次5分鐘(zhong)。1% Triton X-100處理10分鐘(zhong),用PBS洗(xi)三次,每(mei)次5分鐘(zhong)。
2、蛋白酶消化
將1ul 試劑(A)50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中,滴加到組織上,37℃孵育10-20分(fen)鐘。消化結束(shu)后,用(yong)PBS洗三次,每次5分(fen)鐘。
3、封閉
用3%的雙氧水(H2O2)室溫封閉(bi)10分(fen)鐘,封閉(bi)結束后用PBS洗三次,每次5分(fen)鐘。
4、陽性對照組織的處理
將組織用DNase I消(xiao)化,以(yi)獲得斷裂(lie)的DNA,即成Tunel染色陽(yang)性的對照。陽(yang)性對照組織也可以(yi)選(xuan)用小(xiao)鼠的小(xiao)腸組織切(qie)片。
純水(shui) | 46 ul |
試劑(B): 10 × DNase I Buffer | 5 ul |
試劑(C): DNase I | 1 ul |
共計 | 50 ul |
將50 ul DNase I消化液滴加于組織上,37℃孵育10-30分鐘,消化結束后,用PBS洗三次,每次5分鐘。
5、連接:
連(lian)接(jie)反應前用50 ul Equilibration Buffer孵育(yu)標(biao)本5-10分(fen)鐘(zhong)。孵育(yu)過程(cheng)中按下表配制連(lian)接(jie)工(gong)作(zuo)液。去除標(biao)本上(shang)的Equilibration Buffer后(hou),直接(jie)滴(di)加(jia)50ul 連(lian)接(jie)工(gong)作(zuo)液,37℃孵育(yu)1-2小時,染(ran)色結束后(hou),用PBS洗(xi)三次,每次5分(fen)鐘(zhong)。
試劑(D)Equilibration Buffer | 37 ul |
試劑(E)5×TdT Enzyme Buffer | 10 ul |
試劑(F)Recombinant TdT Enzyme | 1 ul |
試(shi)劑(G)Biotin-11-dUTP | 1 ul |
試劑(ji)(H)dATP | 1 ul |
共計(ji) | 50 ul |
6、標志
取1 ul 試劑(I)Streptavidin-HRP加入到50ul PBS 中,混勻后滴加至組織上,37℃避光孵育30分鐘,隨后用PBS洗三次,每次5分鐘。
7、顯色
取50 ul 試(shi)劑(ji)(J)DAB-A solution 與2.5 ul 試(shi)劑(ji)(K)DAB-B solution混勻后(hou),滴(di)加至組織上,室(shi)溫顯(xian)色反應30秒(miao)至5分(fen)鐘。顯(xian)色結(jie)束(shu)后(hou),用(yong)PBS洗三次(ci),每(mei)次(ci)5分(fen)鐘
8、蘇木素復染
每組織上(shang)滴(di)加數滴(di)Mayer’s蘇(su)木(mu)素染(ran)色(se)液,染(ran)色(se)1-5分鐘(zhong),隨后(hou)用(yong)(yong)自來(lai)水沖(chong)洗反(fan)藍,如蘇(su)木(mu)素染(ran)色(se)過深(shen),可用(yong)(yong)1%鹽酸酒精溶液分化數秒,再(zai)次(ci)反(fan)藍;如蘇(su)木(mu)素染(ran)色(se)過淺,可用(yong)(yong)蘇(su)木(mu)素再(zai)次(ci)染(ran)色(se),并(bing)延長染(ran)色(se)時(shi)間。
9、封片觀察
經梯(ti)度酒精脫水(shui),二甲苯透明后,滴加中性樹膠,加蓋玻片封(feng)片,光(guang)學顯微鏡下觀察拍照。
注(zhu)意事項(xiang):
1、Proteinase K 消化(hua)時間需要摸索,冰凍切(qie)片 10 min 左右,石(shi)蠟切(qie)片時間應適(shi)當延長。
2、陰性對(dui)照體(ti)系:配制連接工作液時用純水(shui)替代TdT Enzyme。
3、連接與(yu)標志反應時應注(zhu)意避光。
4、實驗過程中請穿戴手套、實驗服等,做好個人防護。
備注:
產品信息可能會有優(you)化升級,請以(yi)實(shi)際標(biao)簽(qian)信息為(wei)準。
本產品(pin)僅供科研使用。請(qing)勿用于(yu)醫藥、臨床診(zhen)斷(duan)或治療,食品(pin)及化妝品(pin)等用途。請(qing)勿存(cun)放于(yu)普通住(zhu)宅區(qu)。
為(wei)了您的安全和健康,請在實驗過程中做好防護(hu)工作。
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