更新日期:2023-12-14
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廠商性質:生產廠家
所在城市:上海市
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
其原理(li)是在末端脫氧(yang)核糖核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的(de)作用下,在基(ji)(ji)因組(zu)DNA斷裂時暴露出的(de)3′-羥(qian)基(ji)(ji)(3′-OH)末端摻入被(bei)Alexa Fluor 488染料(liao)標(biao)(biao)志的(de)dUTP,使凋(diao)亡的(de)細胞(bao)被(bei)標(biao)(biao)志上(shang)綠色熒(ying)光,從而可以(yi)用熒(ying)光顯(xian)微鏡或流式細胞(bao)儀檢測。
本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色,染色步驟簡便,應用范圍廣泛,可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養細胞的凋亡情況。
包裝清單:
產品(pin)編號 | 產品(pin)名稱 | 包裝(zhuang)1 | 包裝2 |
SJ1272 | TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 488) | 20T | 50T |
● | 說明書 | 一份 |
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產品組成:
編號(hao) | 組分 | 20T | 50T |
試劑(A) | 50× Proteinase K | 20 ul | 100 ul |
試劑(B) | 10 × DNase I Buffer | 100 ul | 500 ul |
試(shi)劑(C) | DNase I | 20 ul | 100 ul |
試劑(D) | Equilibration Buffer | 2 ml | 10 ml |
試劑(ji)(E) | 5×TdT Enzyme Buffer | 200 ul | 1 ml |
試劑(F) | Recombinant TdT Enzyme | 20 ul | 100 ul |
試(shi)劑(G) | Alexa Fluor 488-dUTP | 20 ul | 100 ul |
試劑(H) | dATP | 20 ul | 100 ul |
試劑(ji)(I) | 封片劑(ji)(含DAPI) | 1.5 ml | 7.5 ml |
保(bao)存(cun)條件:
-20 ℃保存(cun),一年(nian)有效(xiao)。
操作步驟:
1、樣本(ben)處理:
a) 石蠟(la)(la)(la)切片:經二甲笨、酒精脫蠟(la)(la)(la),復水。脫蠟(la)(la)(la)應充(chong)分。
b) 冰凍切片:流(liu)水(shui)沖(chong)洗,去除OCT包埋膠后,用純水(shui)洗3次。
c) 細(xi)胞飛片:用組(zu)織固(gu)定(ding)液固(gu)定(ding)后,用PBS洗三(san)次,每(mei)次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘,用PBS洗三(san)次,每(mei)次5分鐘。
2、蛋白酶消(xiao)化
將1ul 試劑(ji)(A)50× Proteinase K稀釋于(yu)50ul PBS中(zhong),滴加到(dao)組織上,37℃孵育10-20分鐘(zhong)。消化結束后,用PBS洗(xi)三次,每次5分鐘(zhong)。
3、陽性對照組(zu)織的處理
將(jiang)組織用(yong)DNase I消化,以獲得斷裂的DNA,即成Tunel染色陽性(xing)的對照。陽性(xing)對照組織也可以選(xuan)用(yong)小鼠的小腸組織切片。
純水 | 46 ul |
試劑(B): 10 × DNase I Buffer | 5 ul |
試劑(C): DNase I | 1 ul |
共計 | 50 ul |
將(jiang)50 ul DNase I消化液滴加于(yu)組織上,37℃孵育10-30分(fen)鐘,消化結(jie)束后,用PBS洗三次,每(mei)次5分(fen)鐘。
4、Tunel標(biao)志染色:
Tunel標志染(ran)(ran)色前用(yong)50 ul Equilibration Buffer孵育(yu)標本(ben)(ben)5-10分鐘(zhong)。孵育(yu)過程中按下表配制Tunel染(ran)(ran)色工作(zuo)液。去(qu)除(chu)標本(ben)(ben)上的Equilibration Buffer后(hou),直(zhi)接滴(di)加50ul Tunel染(ran)(ran)色液,37℃孵育(yu)1-2小時,染(ran)(ran)色結束(shu)后(hou),用(yong)PBS洗三次(ci),每(mei)次(ci)5分鐘(zhong)。
試劑(D)Equilibration Buffer | 37 ul |
試劑(E)5×TdT Enzyme Buffer | 10 ul |
試劑(F)Recombinant TdT Enzyme | 1 ul |
試劑(G)Alexa Fluor 488-dUTP | 1 ul |
試(shi)劑(H)dATP | 1 ul |
共計 | 50 ul |
5、封片:
每組織(zhi)上滴加一滴封劑(ji)(ji),小心(xin)蓋(gai)上蓋(gai)玻片(pian),避免產生(sheng)氣泡(pao)。用(yong)吸水紙吸去多余的封片(pian)劑(ji)(ji)。熒光顯微鏡下觀察。
注意事(shi)項(xiang):
1、Proteinase K 消化時(shi)間需要(yao)摸索(suo),冰凍切(qie)片 10 min 左(zuo)右,石(shi)蠟切(qie)片時(shi)間應(ying)適當延長。
2、陰性對照體系:配制Tunel染色工(gong)作(zuo)液時(shi)用純水替代TdT Enzyme。
3、懸浮細胞用離心的方法(fa)收(shou)集細胞,所有反應(ying)在離心管中(zhong)進行,染(ran)色結(jie)束后,可在熒光顯微下(xia)觀察,也(ye)可以用流式細胞儀(yi)檢(jian)測。
4、Tunel標志(zhi)染(ran)色(se)時應注意(yi)避(bi)光。
5、實驗(yan)過程(cheng)中請穿(chuan)戴手套、實驗(yan)服(fu)等,做好個(ge)人(ren)防護(hu)。
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